糖组结构表征
Characterization of Glycon structure
单糖组成测定分析
多糖(polysaccharide)是由糖苷键结合的糖链,至少要超过10个的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物。随着活性多糖功能不断被研究阐明,多糖在生物研究及健康产品生产中起着越来越重要的作用。多糖检测平台包括单糖组成、多糖分子量、多糖红外光谱、多糖甲基化分析、多糖核磁等一系列的多糖分析检测技术,为多糖产品研究、研发提供专业技术服务及支撑。单糖组成测定是研究多糖结构的基础,本平台通过酸解将多糖分解为单糖,利用液相仪器对多糖中的单糖组分及含量进行测定。
(1)1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化液相法【PMP衍生化-HPLC法】
PMP衍生化-HPLC法单糖组成测定,在单糖检测中应用广泛,具有稳定性好、普适性强等优点,测试流程:酸水解→PMP衍生化→液相上机测试。PMP是目前应用广、适用性高的单糖衍生剂,PMP可使羰基上多两个吡喃啉酮单元,使单糖带有发色基团,它可以尽可能的减少色谱中杂峰的出现,检出限低至μg/L。单糖组成测定常见单糖种类:甘露糖Man、氨基葡萄糖GlcN、鼠李糖Rha、葡萄糖醛酸GlcA、半乳糖醛酸GalA、氨基半乳糖GalN、葡萄糖Glc、半乳糖Gal、木糖Xyl、阿拉伯糖Ara、岩藻糖Fuc。PMP衍生化的不足在于其单糖种类的分析结果可能会不完整,果糖和其它非还原糖分子上的空间位阻或缺乏醛基所致,不能与PMP等典型的衍生化试剂发生反应,对果糖不能进行检测。

图1 单糖标准品和多糖样品PMP衍生化-HPLC法色谱图
(2)高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法【HPAEC-PAD法】
高效阴离子交换色谱(HPAEC)作为糖类化合物常用的分析方法之一,采用高效能的离子交换树脂柱分离及耦合脉冲安培检测器(PAD),该方法的优点包括前处理简单,分析速度快,灵敏度高,无需衍生及检出限低等,测试流程:酸水解→离子色谱仪上机测试。单糖组成测定单糖种类:岩藻糖Fuc、阿拉伯糖Ara、鼠李糖Rha、半乳糖Gal、葡萄糖Glc、木糖Xyl、甘露糖Man、果糖Fru、核糖Rib、半乳糖醛酸GalA、古洛糖醛酸GulA、葡萄糖醛酸GlcA、甘露糖醛酸ManA。该方法调整酸水解条件,可用于含有果糖的检测。

图2 单糖标准品和多糖样品离子色谱图
服务说明:
(1)单糖组成检测分析,适用于粗多糖、纯化多糖,待测多糖样品送样量≥10mg,不同样品和不同测试目的有所差异,敬请咨询。
(2)由于果聚糖对水解条件比较敏感(高强度易导致降解),特别是高温下容易被破坏,多糖样品常规处理方法未检测到果糖,需调整酸水解条件,可用于含有果糖的检测,若要测试果糖请告知,默选常规处理方式处理样品。
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