黄酮类物质检测分析 专业检测服务

      黄酮类化合物泛指具有酚羟基的两个苯环通过中央三碳原子相互连接形成的一系列化合物，是一类具有2-苯基色原酮-4-酮骨架的黄酮类化合物，其基本的母核为2-苯基色原酮类化合物。黄酮类化合物主要存在于各种水果蔬菜中，也存在于茶叶，葡萄酒，植物的种子和根茎中，多具有颜色，在植物体内大部分与糖结合成苷，一部分以游离形式存在。其在生物体内的生理生化功能中起着非常重要的功能，具有抗炎症或者抗氧化的功效，也有文献报道能够抑制肿瘤的形成。

      华士特生物建立了可靠的黄酮类物质分析方法，可检测样品总黄酮含量和多种黄酮类单体含量，具体见下表：

    AlCl3 法其反应原理：黄酮母核上有3-OH和/或5-OH，B 环上有邻位二经基时( 这是黄酮类化合物的典型结构)，AlCl3可与之生成黄色的黄酮铝配合物，从而进行显色定量。AlCl3法测定时，芦丁、桑色素等黄酮类物质反应强烈，而对酚酸、原花色素的反应很小，因此该法对黄酮类化合物的专属性较强。

    NaNO2-Al(NO3)3 法其反应原理：酚羟基中的氧和铝产生黄色络合物，加入亚硝酸钠和氢氧化钠，在碱性条件下呈红色，在510nm处有最大吸收，反应显色在60min内稳定，源于芦丁含量测定法，并逐步用于黄酮类化合物的测定，后来发现这并不是黄酮类化合物的专属反应，因为凡具有也只有具有邻苯二轻基的物质，均能用此法进行显色定量。 

    因此，NaNO2 -Al(NO3)3法显色较为稳定，AlCl3法对黄酮类化合物的专属性较强，但又有自己的缺点，所以要根据测试样的特点具体进行选择。

    2. 黄酮单体测定
　　对于常见的黄酮类化合物单体的定量分析可以用高效液相色谱法(HPLC)分析，以常见的黄酮类化合物卢丁、槲皮素、毛地黄黄酮、芹菜素、木犀草素等为标样进行定量分析。

图1. (1) rutin, (2) quercetin-3-glucoside, (3) quercitrin, (4) myricetin, (5) luteolin, (6) quercetin, (7) apigenin, (8) kaempferol, and (9) isorhamnetin

    对于不常见或尚未有报道的黄酮种类，可以采用液质联用(HPLC-MS)分离与鉴定：

图2: (a) Flavone profiles of transgenic leaves. (b) The MS/MS fragmentation patterns of peak f2. (c) The MS/MS fragmentation pattern of f4