多糖是高分子化合物,其特性及生物活性与其分子量及分布密切相关,分子量的大小及其分布状况是评价多糖价值、质量控制的重要指标。华士特生物糖组测试分析平台,建立了髙效凝胶滲透色谱法(HPGPC)和凝胶色谱-示差-多角度激光光散射(GPC-RI-MALS法)分子量检测分析方法,根据原料中多糖特性和测试目的,选择多糖分子量及其分子量分布测定方法,用于多糖质控或者判断多糖均一性。
(1)高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)分子量检测分析:以不同分子量的右旋糖酐为标准品,采用HPGPC法,使用高效凝胶渗透色谱串联柱,示差检测器检测,采用GPC软件对结果进行分析,以标准品相对分子质量的对数值为纵坐标,以相应色谱峰的保留时间为横坐标进行线性回归,得回归方程,技术峰位分子量(Mp)、重均分子量(Mw)和数均分子量(Mn)以及分子量分布指数D(Mw/Mn),用于测定多糖分子量和检测多糖纯度。
图 多糖样品HPGPC色谱图(48.8min左右为流动相的峰)
(2)凝胶色谱-示差-多角度激光光散射(GPC-RI-MALS法)分子量检测分析:测得大分子绝对分子量、分子旋转半径以及分子量分布等,还可获得多糖的聚集状态信息(棒状、无规则线团或球形),兼具色谱法和光散射法优点。在不用标准品作校正曲线情况下,便可直接测定高分子物质,能快速、准确地测出高分子物质的绝对重均分子量(Mw)、数均分子量(Mn)、Z均分子量(Mz)、分子量分布及分子的分支、聚集态等。
图 多糖样品GPC-RI-MALS色谱图(红线:多角度激光光散射信号;蓝线:示差信号;黑线:由两种信号拟合出的分子量)
服务说明:
多糖分子量检测分析,待测多糖样品送样量≥10mg,不同样品和不同测试目的有所差异,选择适合的多糖分子量及其分子量分布测定方法,敬请咨询