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ITRAQ定量

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  iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术是由美国应用生物系统公司ABI研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用4种或8种同位素的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,然后进行串联质谱分析,可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量。
 
  iTRAQ试剂由三部分组成:报告基团、质量平衡集团和肽反应标记试剂基团,形成4种或8种相对分子质量均等量的异位标签。iTRAQ试剂用于标记酶解后的肽段。在质谱图中,任何一种iTRAQ试剂标记的不同样本中的同一肽段表现为相同的质荷比。在串联质谱中,报告基团、质量平衡基团和多肽反应基团之间的键断裂,质量平衡基团丢失,带不同同位素标签的同一多肽产生不同的报告离子,根据报告离子的信号强度值可获得样品间相同肽段的定量信息,再经过软件处理得到蛋白质的定量信息。
 
 
蛋白质
 
iTRAQ定量技术流程图
 
  实验流程
 
蛋白质
 
 
  技术特点
  可同时对2-8种不同条件样品进行蛋白质差异分析。
  具备广泛的适用性:胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等。
  自动化程度高,定性与定量同步进行,结果可靠准确。
  与凝胶分离的蛋白质定量技术相比,iTRAQ质谱定量技术可检测到更多类型的蛋白质分子,如低丰度蛋白质、强酸性蛋白质、<10KD或>100KD的蛋白质分子。
 
  应用领域及范围
  疾病标志物筛选、作用机制研究、植物抗逆研究、药物作用靶点研究、特殊功能蛋白质筛选、物种蛋白质草图构建。
  适合大样本量的定量比较,对无法用标记定量实现的实验设计,用label-free技术。
 
  样品要求
 
蛋白质
 
  注:尿液样品需提供5mL以上的量。
  真菌孢子类样品,送样量加倍。
  血清、血浆、脑脊液等样品需去除高峰度蛋白。
  植物花瓣、根、茎、果皮、果肉,以及动物含脂肪的组织送样量加倍。
  蛋白缓冲液中不能含有SDS、NP40、Triton、X-100各类去污剂。
 
  项目周期
 
蛋白质
 
 
 
 
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