蛋白质磷酸化修饰是生物体内普遍存在的调节机制，虽然细胞内约有30%的蛋白能发生磷酸化，但磷酸化修饰是一个动态过程，在特定时间及特定刺激条件下，细胞内磷酸化蛋白只占总量的1%-2%，并且对磷酸化修饰来说，其本身是一个可逆的过程，磷酸化修饰不去磷酸化修饰的转换十分快速。因此，磷酸化富集技术对于磷酸化蛋白质组学的研究尤为关键。目前，基于IMAC和TiO2的磷酸化肽段富集技术，结合高通量液相色谱质谱联用技术，成为高通量定性和定量研究蛋白质磷酸化修饰的最有效手段。
磷酸化定量蛋白组学分析流程
实验流程
技术特点
采用主流的TiO2/IMAC富集方法，特异性高，富集效率好。
通过高分辨率、高扫描速度的质谱，对富集的磷酸化肽段进行大规模鉴定。
结合常用的定量技术可对不同样品间的磷酸化水平的差异进行定量比较。
应用领域及范围
疾病标志物筛选、作用机制研究、植物抗逆研究、药物作用靶点研究、特殊功能蛋白质筛选、物种蛋白质草图构建。
样品要求
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蛋白溶液 |
动物组织 |
植物组织 |
真菌 |
细菌 |
细胞样品 |
体液样品 |
血清、血浆 |
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≥10mg |
≥250mg |
≥2.5g |
≥2.5g |
≥500mg |
≥5×107 |
请咨询 |
≥1mL |
注：尿液样品需提供5mL以上的量。
真菌孢子类样品，送样量加倍。
血清、血浆、脑脊液等样品需去除高峰度蛋白。
植物花瓣、根、茎、果皮、果肉，以及动物含脂肪的组织送样量加倍。
蛋白缓冲液中不能含有SDS、NP40、Triton、X-100各类去污剂。
项目周期
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进展 |
时间周期 |
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收样/质控 |
1-2个工作日 |
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样品处理 |
5-6个工作日 |
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质谱上机 |
2-3个工作日 |
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数据分析 |
2-3个工作日 |
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总计 |
不超过25个工作日 |
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超过10个样品每增加1个增加2个工作日 |
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